亦称“超低温保藏法”。菌种保藏方法之一。将菌种悬浮于无菌的10%甘油或10%二甲基亚砜水溶液中，装入安瓿，然后降温（控制温度下降速率为每分钟1℃），使悬液冻结，至－35℃后，用纸包好安瓿，立即放入液氮贮存器（又称“液氮冰箱”，液相为－196℃，气相为－150℃）中。此法可长期保存菌种，并能减少菌种变异。恢复培养时，从贮存器中取出安瓿，迅速置于38～40℃水浴中摇动，使悬液融化，开启安瓿，将菌种接种于适宜的培养基中。