一种常用的最有效的灭菌法。将物品置于高压蒸汽灭菌器（亦称“高压蒸锅”）内，一般用热蒸汽加压至103.4千帕（约121℃），持续15～30分钟，可杀灭所有微生物及细菌芽孢。常用于一般培养基、外科手术敷料、耐热的注射药液等物品的灭菌。体积较大的含菌污物或发酵原料，可适当地增高压力进行灭菌。